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          伯樂bio-rad轉印槽的使用方法步驟

          發表時間:2019-08-27  |  點擊率:2035
          伯樂bio-rad轉印槽的使用方法步驟:
            全程請戴手套操作,以免污染伯樂bio-rad轉印槽!
            1)電泳后SDS-PAGE 膠片浸在轉印緩沖液中,洗2~3 次,每次10min.
            2)取出伯樂bio-rad轉印槽,先小心放一攪拌子在底部,再倒一半轉印緩沖液。
            3)取轉印紙切成約如膠片大小,先在方形培養皿中以少許甲醇浸濕數秒鐘,再置入伯樂bio-rad轉印槽中的緩沖液10 min 后使用。 另取兩張濾紙,以及兩片方形海綿墊,都放在伯樂轉印槽的緩沖液中備用。
            4)取出轉印夾打開平放,先墊一張方形海棉墊,鋪上一張濕濾紙,小心平鋪SDS-PAGE膠上去,然后小心迭上已潤濕的轉印紙,用涂菌玻璃棒趕出氣泡;轉印紙再滴上數滴緩沖液后,加蓋一層濾紙,及另一張海綿,也都不可陷入氣泡,即可把整個轉印三明治卡夾裝好。
            膠迭到轉印紙時,一次成功,不要重作,否則蛋白質色帶可能會印上去,產生重迭影像。
            5)將轉印三明治置入已經放有一半轉印緩沖液的伯樂bio-rad轉印槽中,注意有轉印紙的那一面向正極(紅色),膠片那面向負極(黑色)。
            6)當三明治都放入伯樂bio-rad轉印槽后,以轉印緩沖液蓋滿所有的三明治,小心動一動卡夾,除去附在卡夾內外的氣泡,蓋上蓋子,放到一攪拌器上,打開攪拌器開始攪拌,同時接好電源,裝置完成后放置10 min.
            7)以300mA開始轉印,溫度會漸漸上升,轉印1.5 h左右 后中止轉印,取出轉印三明治,打開后依次取出轉印紙及膠。
            具體轉印條件要根據蛋白的大小進行優化,注意低溫。
            8)轉印后的膠片可以繼續進行染色,看有無蛋白質殘留。若電泳時加有藍色標準蛋白質marker(SeeBlue),則可在轉印紙上看到藍色的色帶,確定轉印成功,并可評估轉印效率。
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